磷酸化蛋白提取试剂盒说明书
阅读次数:1005 发布时间:2020/7/7 11:11:55
磷酸化蛋白提取试剂盒说明书
1、组织总蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀,放置在冰上备用;
称取0.1g的新鲜组织,放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处,用眼科剪将组织块尽可能的剪碎,然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液,研磨直至没有明显的组织块,这个过程注意冰上操作;
将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中,4 oC 12000g离心30min;
吸取上清至新的管中;
进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80 oC,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)
2、细胞总蛋白的提取
裂解液的用量:107个细胞需要裂解液1ml;
贴壁细胞:弃去培养基,用冷的PBS洗两次,弃去PBS,然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞,
将刮离的细胞裂解液移入EP管中,颠倒裂解20-30min
悬浮细胞:4 oC 400g离心收集细胞,用冷的PBS洗两次细胞,同样按细胞数加入裂解液,
涡旋10s,放置冰上裂解10min,重复3-4次;
裂解完毕之后,将细胞裂解液4 oC 12000g离心30min;
将上清移入新的EP管中;
进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80 oC,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)
注意事项:
实验过程,所有试剂都要需要预冷或者即融,保证操作过程中的低温环境;
PSMF(有毒)现用现加,因为PMSF在水溶液中会快速降解;
单位磷酸化蛋白提取试剂盒说明书 |
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磷酸化蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取总蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,作用较为强烈,可快速获得总蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。磷酸化蛋白提取试剂盒说明书
产品组成:
| 规格 | 储存条件 |
裂解液 | 100 ml | 2-8 oC |
磷酸酶抑制剂(100x) | 1ml | -20 oC |
蛋白酶抑制剂(100x) | 1 ml | |
PMSF(100x) | 1ml |
操作方法:
1、组织总蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀,放置在冰上备用;
称取0.1g的新鲜组织,放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处,用眼科剪将组织块尽可能的剪碎,然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液,研磨直至没有明显的组织块,这个过程注意冰上操作;
将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中,4 oC 12000g离心30min;
吸取上清至新的管中;
进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80 oC,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)
2、细胞总蛋白的提取
裂解液的用量:107个细胞需要裂解液1ml;
贴壁细胞:弃去培养基,用冷的PBS洗两次,弃去PBS,然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞,
将刮离的细胞裂解液移入EP管中,颠倒裂解20-30min
悬浮细胞:4 oC 400g离心收集细胞,用冷的PBS洗两次细胞,同样按细胞数加入裂解液,
涡旋10s,放置冰上裂解10min,重复3-4次;
裂解完毕之后,将细胞裂解液4 oC 12000g离心30min;
将上清移入新的EP管中;
进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80 oC,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)
注意事项:
实验过程,所有试剂都要需要预冷或者即融,保证操作过程中的低温环境;
PSMF(有毒)现用现加,因为PMSF在水溶液中会快速降解;
注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。