磷酸化蛋白提取试剂盒说明书
阅读次数:1005 发布时间:2020/7/7 11:11:55
分享到:
 磷酸化蛋白提取试剂盒说明书
单位磷酸化蛋白提取试剂盒说明书  

磷酸化蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取总蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,作用较为强烈,可快速获得总蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。磷酸化蛋白提取试剂盒说明书
产品组成:

 

规格

储存条件

裂解液

100 ml

2-8 oC

磷酸酶抑制剂(100x

1ml

-20 oC

蛋白酶抑制剂(100x

1 ml

PMSF100x

1ml

 

操作方法:
1、组织总蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀,放置在冰上备用;
称取0.1g的新鲜组织,放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处,用眼科剪将组织块尽可能的剪碎,然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液,研磨直至没有明显的组织块,这个过程注意冰上操作;
将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中,4 oC 12000g离心30min;
吸取上清至新的管中;
进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80 oC,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)
2、细胞总蛋白的提取
裂解液的用量:107个细胞需要裂解液1ml;
贴壁细胞:弃去培养基,用冷的PBS洗两次,弃去PBS,然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞,
将刮离的细胞裂解液移入EP管中,颠倒裂解20-30min
悬浮细胞:4 oC 400g离心收集细胞,用冷的PBS洗两次细胞,同样按细胞数加入裂解液,
涡旋10s,放置冰上裂解10min,重复3-4次;
裂解完毕之后,将细胞裂解液4 oC 12000g离心30min;
将上清移入新的EP管中;
进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80 oC,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)

注意事项:
实验过程,所有试剂都要需要预冷或者即融,保证操作过程中的低温环境;
PSMF(有毒)现用现加,因为PMSF在水溶液中会快速降解;
 

 

注意:

1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

同类相关产品

上海一基实业有限公司:测试盒类,培养基类,其他生化试剂,缓冲剂,表面活性剂,分离材料及耗材,维生素类
地址:上海市外高桥菲拉路55号705 电话:021-60526763 传真:021-60548336 ICP备案号:沪ICP备17026694号-2 技术支持:阿仪网 总访问量:8784139

联系方式

021-60526763
13311756052

工作时间

(8:30-17:30)

13

阿仪网推荐收藏该企业网站