细胞周期碘化丙啶红色荧光流式细胞分析试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

细胞周期碘化丙啶（）红色荧光流式细胞分析试剂是种旨在通过细胞流式仪测定细胞中DNA结合碘化丙啶染料程度，来定量DNA含量，以进步获取细胞周期分布状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞（动物、人体、植物、昆虫等）的细胞周期分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、细胞分裂、代谢等的研究。产品严格无菌，即到即用，分辨率高，操作简捷，性能稳定。

技术背景

细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标。通过DNA结合染料，借助细胞流式仪，测定出DNA含量，根据DNA含量随着细胞周期的不同而发生变化，来确定和区别细胞周期的不同阶段。流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为体的高科学技术。凋亡细胞是在正常G0/G1峰细胞群出现亚二倍体峰（sub-G1）细胞群。

产品内容

清理液（Reagent A）    100毫升

固着液（Reagent B）    100毫升

缓冲液（Reagent C）     50毫升

染色液（Reagent D）  2毫升

产品说明书 1份

保存方法

保存缓冲液（Reagent C）和染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent D）避免光照，有效保证6月

用户自备

HANKS平衡盐溶液（12022）或PBS缓冲溶液（12033）：用于清洗细胞

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于细胞脱离

完全细胞培养液（12052）：用于中和胰蛋白酶的处理

15毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作

1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器

（微型）台式离心机：用于细胞收集的操作

细胞流式仪：用于细胞荧光分析

实验步骤

实验开始，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。移出500微升缓冲液（Reagent C）到新的1.5毫升离心管，加入20微升染色液（Reagent D）混匀后标记为染色工作液，置于暗室里，避免光照。然后进行下列操作。

1． 准备1瓶25cm²细胞培养瓶的待测细胞，铺满率达70％（约1百万细胞数）

2． 小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集漂浮细胞）

3． 加入2.5毫升用户自备的HANKS平衡盐溶液或PBS缓冲溶液到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面

4． 小心移出2.5毫升清洗液到上述15毫升锥形离心管

5． 加入1毫升胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液到细胞培养瓶，铺满整个培养平面

6． 置入37℃培养箱孵育1分种

7． 振动培养瓶，使细胞脱落，然后加入5毫升用户自备的完全细胞培养液

8． 移入到上述15毫升锥形离心管（悬浮细胞从这步骤开始）

9． 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g

10． 小心抽去上清液

11． 加入1毫升预冷的清理液（Reagent A）到15毫升锥形离心管，混匀

12． 移入到1.5毫升离心管

13． 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为500g（或2000RPM，例如EPPENDORF 5415）

14． 小心抽去上清液

15． 加入1毫升预冷的固着液（Reagent B），混匀

16． 放进4℃冰箱里孵育16小时

17． 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为500g（或2000RPM，例如EPPENDORF 5415）

18． 小心抽去固着液

19． 加入500微升染色工作液，用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群

20． 在暗室里37℃培养箱里孵育45分钟

21． 移入到细胞流式仪用测试管（可放进4℃冰箱里待测）

22． 即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氩离子激光出现红色荧光（或488nm激发波长，610nm散发波长），观察50000个细胞以上

注意事项

1． 本产品为100次操作

2． 确保实验准确性，须收集所有悬浮和贴壁细胞

3． 可用35mm培养皿或6孔培养板，细胞总量不得少于30万

4． 操作时，须戴手套

5． 孵育时，必须避免光照

6． 建议细胞染色完成后，即刻进行细胞流式仪分析。如果放进4℃冰箱里待测，不要超过1周

7． 细胞流式仪分析，须混匀内容物，避免细胞成团

8． 细胞检测量不得少于10000个

9． 告知流式仪技术员有关细胞类型

10． 本公司提供系列细胞周期分析试剂产品

原创作者：上海一基实业有限公司